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DNA提取

文章出處:解決方案責任編輯:愛必勝生物科技(東莞)有限公司 發表時間:2023-06-17

核酸提取是指將核酸(DNA和RNA)從細胞中提取出來的過程,總的來說包括細胞裂解、核酸純化及后續核酸濃度、純度測定的步驟。根據原始樣品的種類和核酸產物后續的各種應用目的,細胞裂解和核酸純化步驟有不同的處理方法和要求。

實驗室中的DNA提?。?

案例一:小鼠基因型判定實驗的模板DNA提取

初始樣品為小鼠尾切段?;蛐团卸▽嶒瀸NA模板的濃度、純度要求不高,消化提取過程相對簡單。

實驗步驟:

1.將1cm尾巴切段置于1.5mL微量離心管中,加入適量裂解液(Lysis buffer)和蛋白酶(Proteinase K)于55~65℃水浴過夜消化。

2.充分消化后的尾巴樣品加入沉淀液(Precipitation buffer)后用旋渦混勻儀來使雜質蛋白充分沉淀,雜質沉淀后通過離心操作(如4℃,4000*g,5min),取出溶有目標DNA的上清液,丟棄雜質沉淀。

3.上清液中加入100%異丙醇,小心顛倒離心管30~40次,便可以將產物DNA沉降。離心操作(4℃,10000*g或12000rpm,10min)去除上清。

4.用75%乙醇洗滌兩次DNA產物,待乙醇充分揮發后,用水或TE緩沖液(Tris-EDTA buffer)收獲DNA模板產物。

進行后續的PCR擴增實驗前,可以使用Nanodrop儀器來進行DNA濃度和純度的測定來提高PCR反應的成功率。在PCR擴增實驗不順利的情況下,也可以進一步對DNA產品的完整度進行檢測,具體方法可以參考核酸檢測和核酸擴增的有關內容。

實驗中用到的愛必勝試劑、耗材和儀器:

試劑:裂解液、蛋白酶、沉淀液、異丙醇、乙醇、TE緩沖液

耗材:槍頭、1.5ml微量離心管、(15、50mL)離心管

儀器:旋渦混勻儀、分光光度儀

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